OI 600应用实例 | ACSS2—Hepcidin 通路抑制酒精性肝损伤中的铁死亡

近期发表于《Nature Communications》（IF=15.7，Q1/1区）的研究显示：长期乙醇暴露抑制乙酸辅酶A合成酶2(ACSS2)，阻断乙酸到乙酰辅酶A的生成；随之CBP-依赖的组蛋白乙酰化减少，使肝脏铁调素基因HAMP1/2(hepcidin)转录受抑。铁调控失衡叠加脂质过氧化，引发铁死亡并加重酒精性肝损伤。补回ACSS2、过表达HAMP1/2，或给予Fer-1/DFO/重组hepcidin均能显著改善表型。

疾病痛点：酒精性肝病（Alcoholic Liver Disease, ALD）发病上升、有效药物缺位，移植几乎是末期主要选择——机制与可成药靶点稀缺。

机制新意：把“代谢（ACSS2）-表观（乙酰化）-铁稳态（hepcidin）—细胞死亡（ferroptosis）”串成闭环，为ALD的铁负荷与肝损伤提供统一解释。

人群/动物/细胞多层验证：人群血清乙酸、hepcidin、铁指标；雌雄小鼠乙醇饲喂“急+慢”两种模型；肝细胞体外乙醇暴露。

遗传与药理双路径：肝细胞特异Acss2敲除、AAV-Acss2回补；ACSS2抑制剂加重表型；AAV-Hamp1/2或hepcidin/Fer-1/DFO纠偏。

核心指标：肝功能、生化脂质、炎症因子、铁稳态（HAMP1/2、FPN、TFRC、普鲁士蓝、组织/血清铁）、铁死亡（GSH、LPO、4-HNE、C11-BODIPY、ROS、线粒体超微结构）。

部分方法学

Western blot（化学发光成像）

蛋白检测方法：研究人员将样本经SDS-PAGE分离并转印至0.45 μm NC膜，5%脱脂奶粉封闭后按标准流程完成一抗（4 °C 过夜）与二抗（室温 90 min）孵育，随后使用光仪（BIO-OI）OI600全自动化学发光凝胶成像系统采集ECL条带图像，用于后续定量分析。

相关发现

组蛋白乙酰化变化

检测H3/H4及其位点乙酰化（H3K9ac、H3K14ac、H3K18ac、H3K27ac；H4K5ac、H4K8ac、H4K12ac）条带，显示ACSS2下降伴随乙酰化降低。

ACSS2–CBP相互作用的Co-IP+WB

Flag-ACSS2/HA-CBP过表达体系与内源体系的Co-IP后，以WB条带确认结合。

铁稳态/肝损伤相关蛋白的WB

论文对HAMP1/2（hepcidin）与FPN等铁稳态关键蛋白进行了WB检测，用于评估ACSS2过表达或干预（AAV-Acss2、AAV-Hamp1/2、重组hepcidin、Fer-1/DFO）对通路的纠偏作用；这些WB条带均按同流程由OI600采集。

Fig 5b:AAV-Acss2 转导效率	Fig 6a-b:组蛋白乙酰化位点（H3K9ac/H3K14ac/H3K18ac/H3K27ac；H4K5ac/H4K8ac/H4K12ac）Western blot。 Fig 6c–f：ACSS2 与 CBP 的 Co-IP + WB。